上海勁馬實驗設備有限公司

13296071817

當前位置:上海勁馬實驗設備有限公司 > 技術文章 > 生物素標記蛋白如何操作呢?

公司新聞

生物素標記蛋白如何操作呢?

發布日期:2020/8/20 10:14:38 閱讀次數:333次

下面的操作方法可以使約3~5分子的生物素與1分子的蛋白結合,對某些蛋白來說,生物素與蛋白的分子比可根據不同的生物素化要求進行調整。

1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸鹽緩沖液中,并計算溶解的毫摩爾數。如果蛋白含有不恰當的緩沖液(如Tris或者甘氨酸),可以通過在PBS中透析或濃縮的方法除去。計算:蛋白質量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白質的毫摩爾數。

2. 在打開之前,平衡生物素至室溫。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超純水中,加入足夠量濃度的生物素,一般對于10 mg/ml 蛋白來說超過12倍分子數,對于2 mg/ml 蛋白溶液應超過20倍,或者該試劑也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。

3. 室溫30分鐘,或冰上放置2小時。

4. 用30 ml PBS預洗純化柱,上樣,加入與欲收集量相同的緩沖液,收集0.5 ml 或1 ml 于單獨的管中。

5. 以280 nm 的吸收值測定蛋白含量。

6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用,可加入疊氮鈉、甘油等保存。

HABA法檢測生物素標記效果:

試劑配制:
1. PBS(100 mM 磷酸鹽,150 mM Nacl pH7.2)。
2. HABA/親和素溶液:10 mg 親和素、600 ul10 mM HABA于19.4 ml 的PBS中,該溶液的A500大約在0.9~1.3之間,溶液于4℃保存可穩定2周。如果有沉淀形成(HABA溶液)可過濾后使用。

比色法檢測生物素/蛋白質摩爾質量比:
1. 吸取900 ul HABA/親和素溶液于1ml比色杯。
2. 測定該溶液在500 nm 處的吸收值并記錄為“A500 HABA/Avidin”。
3. 吸取100 ul 生物素標記的蛋白于杯中并測定500 nm 的吸光度值,記為A500 HABA/Avidin/Biotin (數值必須恒定15s 以上)如果A500 HABA/Avidin/Biotin的值不超過(≤)0.3,重新稀釋待測樣品并檢測。
注:計算結果時必須考慮稀釋度。
4. 計算Biotin/Protein摩爾比
①A=生物素化的蛋白毫摩爾濃度=蛋白濃度(mg/ml)/蛋白的分子量
②B=500nm處的吸光度變化(△A500=(0.9×A500HABA/Avidin)-A500HABA/Avidin/Biotin)
③C=生物素的毫摩爾濃度=mmol Biotin/ml反應溶液=△A500/(34,000×光程)
④Biotin/Protein摩爾比=C?10?稀釋倍數/

上海勁馬生物科技有限公司主營:elisa試劑盒,人Elisa試劑盒,大鼠Elisa試劑盒,小鼠Elisa試劑盒,生物試劑,血清,抗體,培養基,標準品,國產血清、GIBCO胎牛血清等。種屬齊全,價格優惠。期待您的來電咨詢與合作!

原創作者:上海勁馬實驗設備有限公司

推薦產品

產品分類

阿儀網 設計制作,未經允許翻錄必究. 聯系人:陳經理 聯系電話:13296071817 ICP備案號:滬ICP備15015681號-6 總訪問量:8928516

主營產品:ELISA試劑盒,豬ELISA試劑盒,雞ELISA試劑盒,綿羊ELISA試劑盒,猴ELISA試劑盒,動物試劑盒、生物試劑、對照品、抗體、血清、培養基等

阿儀網推薦收藏該企業網站
8:30-17:30
13817140470
13296071817
大嘴刨幺安卓版下载 上海时时彩网计划表-首页 竞彩篮球大小分算加时吗 山东11选5走势图今天 比特币价格一年走势 美女棋牌游戏下载 吉利棋牌麻将 双色球复式玩法 陕西11选5开奖结果查询结果 狗狗币行情走势曲线图 广东麻将平台 波克牛牛注册 福彩东方6+1走势图表 新浪爱彩竞彩足球比分即时比分 快中彩几点开奖 股票平台突破图形 捕鸟达人小游戏下载